AVAL D'ADC

DAR étroit. Rendement supérieur. Purification de conjugués anticorps-médicaments avec MCSGP

Moins de cytotoxine gaspillée.

Isolez les espèces DAR cibles sans rejeter le produit ciblé dans les fractions secondaires — démontré sur un modèle d’ADC conjugué à la lysine de type Kadcyla® : 100 % de rendement à 57 % de pureté contre 22 % de rendement à 31 % de pureté pour le lot (DAR 3.0) | jusqu’à 50 % d’opérations de synthèse en moins (DAR 2.0)

Source : Note d’application YMC ChromaCon ADC (CEX, modèle de type Kadcyla®)

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Purification de conjugués anticorps-médicaments (ADC) — illustration

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Le défi de la purification d'ADC : l'hétérogénéité du DAR

La demande d’ADC est en forte augmentation — avec plus d’une douzaine de produits approuvés par la FDA, des centaines de candidats cliniques et une croissance rapide du marché. Cependant, la conjugaison de charges utiles cytotoxiques aux résidus de lysine d’anticorps ou aux cystéines réduites produit un mélange statistique d’espèces DAR. Une distribution étroite du DAR est un attribut de qualité critique — les espèces DAR plus élevées sont éliminées plus rapidement et causent plus de toxicité, tandis que l’anticorps non conjugué (DAR 0) est thérapeutiquement inactif.

La chromatographie d’interaction hydrophobe (HIC) est l’outil préparatif principal pour le contrôle du DAR, mais les différentes espèces DAR ont des propriétés d’adsorption très similaires. La HIC par lots impose une coupe centrale étroite, rejetant un produit ciblé précieux dans les fractions secondaires. Pour les ADC conjugués à la lysine — où les isomères de position compliquent davantage la résolution — les rendements par lots pour un DAR spécifique peuvent être aussi bas que 22 à 34 %.

La solution : MCSGP avec AutoPeak® pour l'homogénéisation du DAR d'ADC

Le MCSGP (purification par gradient de solvant à contre-courant multi-colonnes) élimine le compromis pureté-rendement dans la purification du DAR d’ADC. Deux colonnes chromatographiques identiques recyclent en continu les fractions secondaires DAR impures — récupérant le produit DAR ciblé que la chromatographie par lots rejetterait. Le processus utilise les mêmes résines, tampons et conditions de gradient que votre méthode d’ADC par lots existante — qu’il s’agisse de HIC, CEX ou mode mixte.

Le contrôle de processus dynamique AutoPeak® surveille le profil d’élution d’ADC en temps réel via UV, ajustant automatiquement les fenêtres de collecte pour maintenir la distribution DAR cible — permettant des cycles de polissage DAR robustes et sans surveillance.

Mêmes résines. Mêmes tampons. Contrôle DAR supérieur. Le MCSGP fonctionne avec toutes les principales résines HIC, CEX et à mode mixte — vos conditions d’ADC par lots existantes sont le point de départ. Le recyclage continu des fractions secondaires récupère le produit DAR ciblé des pics qui se chevauchent, offrant jusqu’à 4 fois le rendement par rapport aux lots. AutoPeak® compense en temps réel la variabilité de la conjugaison et le vieillissement des colonnes, permettant des cycles de polissage DAR sans surveillance.

En savoir plus sur le MCSGP avec AutoPeak®

Continuous chromatography - MCSGP — illustration

MSCGP

Résultats prouvés : MCSGP vs. lots pour la purification du DAR d’ADC

Jusqu'à 4×

Amélioration du rendement

+80%

Gain de productivité

55 % ↓

Réduction du tampon

Étude de cas Partie 1 — Conception de l'étude et résultats de pureté/rendement du DAR

Système modèle : Trastuzumab + Atto-488 (ester NHS, ADC conjugué à la lysine de type Kadcyla®) | Mode : CEX — YMC BioPro IEX SmartSep S10 Système : Contichrom CUBE 30 | Analyse : ESI-MS (Q-TOF Bruker Maxis Impact)

DAR cible	Pureté du lot	Rendement du lot	Pureté MCSGP	Rendement MCSGP	Amélioration du rendement
DAR 2.0	59.0%	34%	70.0%	61%	+80 % (à pureté supérieure)
DAR 3.0	30.9%	22%	57.1%	100%	4×
DAR 4.0	50.7%	56%	53.9%	92%	+50 % (à pureté supérieure)
DAR 5.0	47.4%	33%	48.1%	42%	+25%

Le MCSGP a constamment fourni un rendement plus élevé à une pureté égale ou supérieure. Toutes les espèces DAR non voisines ont été éliminées (<5 %). Des DAR inégaux (3.0, 5.0) ont été isolés avec un rendement élevé — infaisable avec la chromatographie par lots et la conjugaison site-spécifique.

Note d’application Chromacon ADC. Première publication en mars 2024. Recherche financée par le projet Eurostars E! 9503. Voir les ressources associées à télécharger.

Étude de cas Partie 2 — Économie de processus et sécurité (DAR 2.0)

Comparaison détaillée des processus pour la purification du DAR 2.0 :

Paramètre	Lot	MCSGP	Amélioration
Pureté	59,0 %	70,0 %	+11 %
Rendement	34 %	61 %	+80 %
Productivité	0,11 g/L/h	0,20 g/L/h	+80 %
Consommation de tampon	142 L/g	64 L/g	−55 %
Charge	4,1 g/L	3,7 g/L	comparable

L’augmentation du rendement de 34 % à 61 % permet d’éviter 50 % des opérations de synthèse pour la même production de produit — réduisant directement le temps d’isolateur, l’exposition aux cytotoxines et la manipulation de composés puissants. Le même produit peut être purifié en deux fois moins de temps ou avec la moitié du volume de colonne.

Avantages opérationnels : pas de re-chromatographie des fractions secondaires, un seul pool de produit par cycle (pas d’analyse de fraction), libération plus rapide des lots, moins d’opérateurs requis.

Note d’application Chromacon ADC. Première publication en mars 2024. Recherche financée par le projet Eurostars E! 9503. Voir les ressources associées à télécharger.

La plateforme Contichrom® : du développement d'ADC à la production

Les systèmes Contichrom® prennent en charge la chromatographie continue HIC, CEX, mode mixte et RP pour le polissage du DAR d’ADC et la capture d’anticorps. Les méthodes s’adaptent de manière prévisible de CUBE → TWIN LPLC Polishing.

Aperçu des systèmes

Contichrom TWIN LPLC continuous chromatography system for capture and polishing

Contichrom® TWIN LPLC – Capture

Accélérez la chromatographie de capture biopharmaceutique à l’échelle de production. Ce système BPF sanitaire utilise CaptureSMB® avec AutomAb® pour maximiser l’utilisation de la résine — permettant un traitement jusqu’à 3 fois plus rapide et une réduction de 50 % de la consommation de résine de Protéine A et de tampon par rapport au mode discontinu. Conception prête pour le NEP pour les anticorps monoclonaux (mAbs), les vecteurs viraux, les conjugués anticorps-médicaments (ADCs) et les protéines recombinantes.

$Contichrom CUBE multi-column FPLC chromatography system with UV detectors and FOXY fraction collector$

Contichrom® CUBE

La plateforme essentielle pour le développement de procédés de chromatographie. Ce système FPLC de paillasse polyvalent de 100 bars exécute la chromatographie en mode batch, batch intégré et continu — incluant MCSGP et CaptureSMB — dès la mise en service. Développez des procédés de purification pour les mAbs, peptides, oligonucléotides, ADCs et vecteurs viraux, avec une mise à l’échelle vérifiée de plus de 100× vers les systèmes pilotes et de production.

Contichrom® TWIN LPLC – Polissage

Apportez le polissage continu à la fabrication biopharmaceutique à l’échelle de production. Ce système GMP sanitaire utilise MCSGP avec AutoPeak® pour éliminer le compromis rendement-pureté, atteignant une augmentation absolue du rendement de +10 à 50 % à la pureté cible tout en réduisant la consommation de tampon par rapport au mode batch. Conception prête pour CIP pour les mAbs, vecteurs viraux, ADC et protéines recombinantes.

Aperçu des systèmes

Note de flux de travail multi-étapes ADC

Plus qu’un simple polissage DAR. La plateforme Contichrom® aborde plusieurs étapes du flux de travail aval des ADC :

Étape de purification d’ADC	Capacité Contichrom	Échelle
Polissage DAR (post-conjugaison)	MCSGP — homogénéisation continue du DAR avec un rendement supérieur	CUBE (CEX, HIC) → TWIN LPLC (HIC)
Élimination des agrégats	MCSGP ou HIC par lots — co-séparés avec les espèces DAR hors cible	CUBE → TWIN LPLC
Élimination de la charge utile/du lieur libre	Lot intégré 2D : CEX → dessalement en un seul processus automatisé	CUBE → TWIN LPLC
Capture d’anticorps (pré-conjugaison)	CaptureSMB® — 2,5 fois plus de productivité en Protéine A, 30-40 % moins de résine (validé par BMS pour la capture d’anticorps monoclonaux)	CUBE → TWIN LPLC
Purification de la charge utile (petite molécule)	MCSGP avec RP — purification de cytotoxine/lieur-charge utile	CUBE → TWIN HPLC
Enrichissement des impuretés	N-Rich — isolation automatisée des impuretés liées aux ADC pour la caractérisation	CUBE

CaptureSMB®

Applications ADC

Polissage DAR et nettoyage post-conjugaison :

ADC conjugués à la lysine (large distribution DAR) La conjugaison non spécifique de la lysine produit la distribution DAR la plus large (DAR 0–7+) avec de nombreux isomères de position. Le MCSGP avec CEX a démontré un rendement jusqu’à 4 fois supérieur sur un modèle de type Kadcyla®, y compris un DAR 3.0 à 100 % de rendement. Le même principe s’applique à la HIC.

ADC conjugués à la cystéine (DAR 0/2/4/6/8) La réduction partielle des ponts disulfures interchaînes produit cinq espèces DAR. La HIC les résout par hydrophobicité — mais les rendements par lots sont faibles. Le polissage HIC continu MCSGP sur le TWIN LPLC récupère le produit DAR 2-4 ciblé à l’échelle de production.

ADC site-spécifiques (THIOMAB, cystéine modifiée, glycoconjugaison, AJICAP™) La conjugaison site-spécifique réduit la distribution DAR mais ne produit que des DAR pairs (2.0, 4.0, 6.0). Le MCSGP affine davantage le pic cible et permet de manière unique des DAR impairs (3.0, 5.0) que la chimie site-spécifique ne peut pas atteindre.

Élimination des agrégats d’ADC Les agrégats issus de l’auto-association de la charge utile hydrophobe co-éluent avec les espèces à DAR élevé tardivement en HIC. Le MCSGP élimine simultanément les agrégats tout en polissant le DAR — combinant deux étapes en une seule.

Applications ADC suite…

Étapes amont et aval connexes :

Élimination de la charge utile et du lieur libres La TFF gère la majeure partie de l’élimination des médicaments libres, mais certaines charges utiles hydrophobes (dimères de PBD) résistent à la TFF. La CEX élimine efficacement la charge utile libre — les conditions de plateforme mAb sont souvent directement transférables. Le CUBE exécute des workflows CEX par lots et des workflows par lots intégrés 2D.

Purification de la charge utile cytotoxique (pré-conjugaison) Les auristatines, maytansinoïdes, dimères de PBD et dérivés de camptothécine nécessitent une purification RP de haute pureté avant la conjugaison. Le MCSGP avec RP-HPLC augmente le rendement de la charge utile — réduisant le coût de ces composés coûteux et puissants.

Capture d’anticorps (pré-conjugaison) L’intermédiaire mAb nécessite une capture par Protéine A avant la conjugaison. CaptureSMB offre une productivité en Protéine A 2,5 fois supérieure et 30 à 40 % moins de résine — validé par Bristol Myers Squibb pour la capture d’anticorps monoclonaux du laboratoire à l’échelle GMP.

En savoir plus sur CaptureSMB avec AutomAb®

Démarrer avec l'ADC MCSGP

Découvrez la plateforme Contichrom® en action avant de vous engager. Évaluez par calcul l’adéquation du MCSGP pour votre étape de polissage DAR d’ADC à partir de vos données HIC ou CEX par lots existantes. Développez votre méthode de fractionnement DAR à l’échelle du laboratoire sur un Contichrom CUBE, puis passez au TWIN LPLC Polishing pour la production d’ADC à l’échelle industrielle.

Découvrez-le d'abord — Démo gratuite ou webinaire

Pas encore familier avec la plateforme Contichrom® ? Commencez ici. YMC ChromaCon propose des démonstrations gratuites et des webinaires d’introduction adaptés à votre équipe.

Sur site à Zurich (une demi-journée, 2 à 4 heures) : découvrez le CUBE en personne, exécutez ChromIQ® en direct, discutez de votre défi de séparation DAR d’ADC avec les scientifiques d’application de YMC ChromaCon
Webinaire à distance (1 à 3 heures) : session interactive en direct couvrant MCSGP, CaptureSMB, N-Rich, le logiciel ChromIQ® et l’écosystème complet Contichrom®
Les sessions peuvent se concentrer spécifiquement sur le MCSGP pour le fractionnement DAR basé sur HIC/CEX et le concept de collecte DAR AutoPeak®

→ Demander une démo gratuite ou un webinaire d’introduction

Évaluation de la modélisation pour les ADC

Prédisez comment le MCSGP se comportera sur votre séparation DAR d’ADC avant de réaliser de nouvelles expériences. YMC ChromaCon évalue l’adéquation du MCSGP et estime les améliorations attendues en termes de rendement et d’homogénéité du DAR à partir de vos données par lots existantes.

Soumettez les détails de votre méthode HIC, CEX ou mode mixte par lots — chromatogramme, gradient, résine, dimensions de la colonne — ainsi que le profil DAR de votre réaction de conjugaison
YMC ChromaCon évalue l’adéquation du MCSGP, simule les points de fonctionnement et estime les améliorations attendues en termes de rendement et de pureté pour vos espèces DAR cibles
La conception du processus MCSGP démarre à partir d’un seul chromatogramme par lots — données de tout système HPLC ou FPLC ; aucun Contichrom® n’est requis
Délai typique : 3 à 5 semaines à compter de la réception des données ; aucun envoi de matériel n’est requis

→ Service de modélisation de processus MCSGP

Développer à l'échelle du laboratoire — Louer ou acheter un CUBE

Le développement de la méthode de polissage DAR MCSGP est réalisé sur le Contichrom CUBE en utilisant votre système de résine et de tampon HIC, CEX ou mode mixte existant. Disponible à la location ou à l’achat.

L’assistant ChromIQ® MCSGP construit le point de fonctionnement initial du polissage DAR à partir de votre chromatogramme par lots — la première exécution MCSGP est généralement réalisable en une journée
Vos conditions de gradient par lots actuelles sont le point de départ — aucun nouveau développement de résine ou de tampon n’est requis
Le contrôle de processus dynamique AutoPeak® surveille le profil d’élution d’ADC en temps réel via UV, ajustant automatiquement les fenêtres de collecte DAR pour compenser les changements de distribution DAR entre les lots de conjugaison, le vieillissement des colonnes et la dérive du temps de rétention

→ Programme de location Contichrom CUBE

→ Acheter un Contichrom CUBE

Passer à la production GMP — Polissage TWIN LPLC

La méthode de polissage DAR MCSGP est transférée directement du CUBE au Contichrom TWIN LPLC Polishing pour la production d’ADC à l’échelle industrielle. YMC ChromaCon fournit des conseils en matière de mise à l’échelle et un support de documentation GMP.

La chimie de la colonne (HIC, CEX ou mode mixte) et les conditions de gradient sont préservées à l’échelle — aucun nouveau développement de résine ou de tampon n’est requis
La logique de contrôle AutoPeak® est transférée du CUBE au TWIN — la même stratégie dynamique de collecte DAR fonctionne à l’échelle de production
Quatre tailles de système TWIN LPLC Polishing (300–2000) couvrent les débits pilotes jusqu’à la pleine production
Support de documentation GMP (IQ/OQ/PQ) et conseils en matière de mise à l’échelle disponibles ; le TWIN LPLC Capture prend également en charge CaptureSMB pour la capture d’anticorps en amont — voir la page mAbs et variants d’anticorps

→ Conseils et formation en matière de mise à l’échelle

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Comment le MCSGP améliore-t-il le rendement du polissage DAR d'ADC ?

Le MCSGP recycle en continu les fractions secondaires DAR que la chromatographie par lots rejette — récupérant le produit DAR ciblé des pics qui se chevauchent. Sur un modèle de type Kadcyla®, le MCSGP a fourni un rendement jusqu’à 4 fois supérieur (DAR 3.0 : 22 % → 100 %) à une pureté DAR égale ou supérieure. Le même principe s’applique aux séparations HIC, CEX et mode mixte.

Le MCSGP fonctionne-t-il avec la HIC pour la séparation DAR ?

Oui. La HIC est le mode préparatif standard de l’industrie pour le contrôle du DAR d’ADC, et le MCSGP est entièrement compatible avec les résines HIC (Butyl, Phenyl, PPG), les gradients de sulfate d’ammonium et les conditions standard à basse pression. L’étude de faisabilité publiée a utilisé la CEX ; la HIC suit la même conception de processus MCSGP. Les deux modes fonctionnent sur le Contichrom CUBE et le TWIN LPLC.

Quels types de conjugaison d'ADC bénéficient le plus du MCSGP ?

Tout ADC présentant une hétérogénéité DAR résiduelle en bénéficie. Les ADC conjugués à la lysine (distribution DAR la plus large) connaissent les gains les plus importants — jusqu’à 4 fois l’amélioration du rendement. Les ADC conjugués à la cystéine bénéficient de l’affinement de la fenêtre DAR 2/4. Les ADC site-spécifiques bénéficient d’un affinement supplémentaire, et le MCSGP permet de manière unique des DAR impairs (3.0, 5.0) que la conjugaison site-spécifique ne peut pas produire.

Le MCSGP peut-il éliminer simultanément les agrégats et les espèces DAR indésirables ?

Oui. Les espèces à DAR élevé et les agrégats sont tous deux plus hydrophobes et co-éluent tardivement en HIC. La séparation en trois fractions du MCSGP les achemine naturellement vers les déchets tout en récupérant le produit DAR cible — combinant le polissage DAR et l’élimination des agrégats en une seule étape chromatographique.

Quel système à l'échelle de production est utilisé pour l'ADC MCSGP ?

Le Contichrom TWIN LPLC. Le polissage DAR basé sur HIC fonctionne à basse pression (<5 bar), bien dans la pression de conception de 7,5 bar du TWIN LPLC. Quatre tailles de système (300–2000) couvrent les débits pilotes jusqu’à la pleine production commerciale. Le même TWIN LPLC exécute également CaptureSMB pour la capture d’anticorps en amont et la chromatographie par lots.

Le même système Contichrom peut-il effectuer la capture d'anticorps et le polissage DAR ?

À l’échelle de développement, le Contichrom CUBE exécute CaptureSMB (capture de Protéine A), MCSGP (polissage DAR), chromatographie par lots et workflows par lots intégrés 2D/3D — couvrant l’ensemble de l’aval d’ADC sur un seul instrument. À l’échelle de production, le TWIN LPLC gère à la fois la capture CaptureSMB et le polissage DAR HIC MCSGP.

Comment le MCSGP réduit-il les risques de sécurité dans la fabrication d'ADC ?

En augmentant le rendement du DAR 2.0 de 34 % à 61 %, le MCSGP réduit de moitié le nombre d’opérations de synthèse de conjugaison nécessaires pour la même production de produit. Cela limite directement le temps d’isolateur, la manipulation de composés puissants et l’exposition aux cytotoxines — tout en réduisant les coûts des matières premières et le gaspillage de charges utiles coûteuses.

Comment AutoPeak® gère-t-il la variabilité de lot à lot de la conjugaison ?

AutoPeak® surveille le profil d’élution d’ADC en temps réel via UV, ajustant dynamiquement les fenêtres de collecte DAR pour compenser les décalages de distribution DAR entre les lots de conjugaison, le vieillissement des colonnes et la dérive du temps de rétention. Cela garantit une production DAR cible constante malgré une composition d’alimentation variable — critique pour les ADC où la chimie de conjugaison introduit une variabilité de lot significative.