{"id":16975,"date":"2025-11-17T11:34:29","date_gmt":"2025-11-17T10:34:29","guid":{"rendered":"https:\/\/www.chromacon.com\/technologies\/enrichissement-continu-n-rich\/"},"modified":"2026-08-31T14:25:46","modified_gmt":"2026-08-31T12:25:46","slug":"enrichissement-continu-n-rich","status":"publish","type":"technology","link":"https:\/\/www.chromacon.com\/fr\/technologies\/enrichissement-continu-n-rich\/","title":{"rendered":"Enrichissement continu (N-Rich\u00ae)"},"content":{"rendered":"
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\n ENRICHISSEMENT \u00c0 DOUBLE COLONNE <\/p>\n \n

\n Chromatographie d\u2019enrichissement continu avec N-Rich\u00ae\n <\/h1>\n \n
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Isolement automatis\u00e9 des impuret\u00e9s \u00e0 l\u2019\u00e9tat de traces.<\/strong><\/p>\n

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Accumulez ce qui est \u00e0 peine pr\u00e9sent \u2014 enrichissement cyclique pour la pr\u00e9paration de standards de r\u00e9f\u00e9rence, l\u2019isolement de variants de charge et la caract\u00e9risation ICH Q3A\/Q6B : facteur d\u2019enrichissement 100\u20131 000\u00d7<\/strong> | 80\u201395 %<\/strong> de puret\u00e9 en une nuit | enti\u00e8rement automatis\u00e9 via l\u2019assistant ChromIQ\u00ae N-Rich\u00ae.<\/p>\n

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Sources : Bigelow et al. <\/em>(BMS), J. Chromatogr. <\/em>A 2021 ; Weldon & M\u00fcller-Sp\u00e4th, J. Chromatogr. A 2022<\/em><\/strong><\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n\n

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\n Demander un webinaire<\/span><\/a><\/span> <\/div>\n
\n Article tutoriel N-Rich<\/span><\/a><\/span> <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n\n
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\n \"background <\/div>\n\n
\n \"N-Rich\" <\/div>\n \n
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\n Demander un webinaire<\/span><\/a><\/span> <\/div>\n
\n Article tutoriel N-Rich<\/span><\/a><\/span> <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n
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\n Le goulot d\u2019\u00e9tranglement de l\u2019isolement <\/h2>\n \n
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Les agences r\u00e9glementaires exigent des standards de r\u00e9f\u00e9rence d\u2019impuret\u00e9s purs et isol\u00e9s \u2014 pas seulement des pics d\u00e9tect\u00e9s. Les directives ICH Q3A et Q6B imposent l\u2019identification structurelle et la qualification toxicologique des impuret\u00e9s \u00e0 l\u2019\u00e9tat de traces et des variants li\u00e9s au produit. Le probl\u00e8me est que ces compos\u00e9s existent \u00e0 0,1\u20135 % de l\u2019alimentation, co-\u00e9luant avec un pic principal dominant 10\u20131 000 fois plus abondant. <\/p>\n

La HPLC pr\u00e9parative par lots conventionnelle n\u2019a aucun m\u00e9canisme pour g\u00e9rer ce ratio. Des centaines d\u2019injections, un regroupement progressif de fractions dilu\u00e9es, des semaines de traitement \u2014 et au final, un mat\u00e9riau qui peut encore \u00eatre trop impur pour \u00eatre utilis\u00e9 comme standard de r\u00e9f\u00e9rence. La synth\u00e8se personnalis\u00e9e co\u00fbte des dizaines de milliers de dollars par compos\u00e9 et est tout simplement impossible pour les impuret\u00e9s biologiques telles que les variants de charge, les glycoformes ou les capsides partiellement remplies qui n\u2019existent que sous forme d\u2019esp\u00e8ces li\u00e9es au produit. <\/p>\n <\/div>\n \n <\/div>\n\n

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N-Rich\u00ae change ce qui est possible<\/h2>\n
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N-Rich\u00ae n\u2019essaie pas d\u2019isoler un compos\u00e9 \u00e0 l\u2019\u00e9tat de traces en un seul passage. Au lieu de cela, il l\u2019accumule sur colonne sur de nombreux cycles \u2014 augmentant progressivement la concentration dans le syst\u00e8me jusqu\u2019\u00e0 ce qu\u2019une quantit\u00e9 suffisante de mat\u00e9riau pur soit disponible pour \u00eatre collect\u00e9e en une seule \u00e9lution finement fractionn\u00e9e. <\/p>\n

Chaque cycle d\u2019enrichissement ajoute davantage de la cible \u00e0 la colonne tout en \u00e9liminant simultan\u00e9ment le compos\u00e9 principal dominant vers les d\u00e9chets. Apr\u00e8s un nombre suffisant de cycles, la cible a \u00e9t\u00e9 concentr\u00e9e au point o\u00f9 elle peut \u00eatre \u00e9lu\u00e9e et fractionn\u00e9e avec une puret\u00e9 qui serait impossible \u00e0 l\u2019abondance d\u2019origine. Le processus fonctionne de mani\u00e8re enti\u00e8rement automatis\u00e9e et sans surveillance \u2014 pendant la nuit, ou sur plusieurs jours pour les cibles \u00e0 tr\u00e8s faible abondance. <\/p>\n

Les r\u00e9sultats des applications valid\u00e9es sont coh\u00e9rents :<\/p>\n\n \n <\/div> \n

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\n 95 % de puret\u00e9 <\/h2>\n \n

\n Variants de charge d\u2019anticorps monoclonaux en 10 h contre 300 h par HPLC (BMS) <\/p>\n \n \n <\/div>\n\n<\/div>\n\n <\/div><\/section><\/div>\n\n\n\n

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\n 3 jours <\/h2>\n \n

\n contre plus de 30 jours pour les anticorps monoclonaux biosimilaires, 9 isoformes
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\n 79\u00d7 <\/h2>\n \n

\n Gain de productivit\u00e9 pour l\u2019isolement d\u2019impuret\u00e9s peptidiques
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\n 69\u00d7 <\/h2>\n \n

\n R\u00e9duction de solvant par rapport \u00e0 la HPLC analytique
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Sources : Bigelow et al. (BMS), J. Chromatogr. A 2021<\/a> \u00b7 Weldon & M\u00fcller-Sp\u00e4th, J. Chromatogr. A 2022<\/a><\/em><\/p>\n

N-Rich\u00ae est un outil fondamentalement diff\u00e9rent du MCSGP. Le MCSGP purifie un produit principal en \u00e9liminant les impuret\u00e9s lat\u00e9rales \u2014 son mat\u00e9riau de d\u00e9part est d\u00e9j\u00e0 relativement pur. N-Rich\u00ae accumule vers<\/em> un compos\u00e9 qui commence \u00e0 l\u2019\u00e9tat de traces et qui pourrait ne jamais \u00eatre r\u00e9soluble en une seule passe sur colonne. Les deux utilisent la m\u00eame plateforme \u00e0 double colonne et une structure d\u2019assistant ChromIQ\u00ae similaire ; le probl\u00e8me qu\u2019ils r\u00e9solvent est diff\u00e9rent. <\/p>\n\n \n <\/div> <\/div>\n<\/div>\n

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\n Comment N-Rich\u00ae fonctionne… Partie 1 <\/h2>\n \n
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N-Rich\u00ae s\u2019ex\u00e9cute en une seule proc\u00e9dure ininterrompue \u00e0 travers quatre \u00e9tapes s\u00e9quentielles :<\/p>\n

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\u00c9tape<\/th>\nCe qui se passe<\/th>\nDur\u00e9e<\/th>\n<\/tr>\n<\/thead>\n
Conception<\/strong><\/td>\nChargement du chromatogramme par lots, d\u00e9finition des limites de recyclage, g\u00e9n\u00e9ration de la m\u00e9thode<\/td>\nConfiguration unique<\/td>\n<\/tr>\n
Enrichissement<\/strong><\/td>\nn cycles d\u2019accumulation cyclique \u2014 le compos\u00e9 cible s\u2019accumule sur colonne, le compos\u00e9 principal est \u00e9limin\u00e9 \u00e0 chaque cycle<\/td>\nn cycles jusqu\u2019\u00e0 ce que suffisamment d\u2019alimentation soit trait\u00e9e<\/td>\n<\/tr>\n
\u00c9puisement<\/strong><\/td>\nUn seul basculement sans nouvelle alimentation \u2014 le compos\u00e9 principal restant est \u00e9limin\u00e9, la cible est concentr\u00e9e avant l\u2019\u00e9lution<\/td>\n1 basculement<\/td>\n<\/tr>\n
\u00c9lution fractionn\u00e9e<\/strong><\/td>\nGradient peu profond sur les deux colonnes en s\u00e9rie \u2014 la cible est \u00e9lu\u00e9e et finement fractionn\u00e9e pour la collecte<\/td>\n\u00c9v\u00e9nement d\u2019\u00e9lution unique<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<\/div>\n <\/div>\n \n <\/div>\n\n
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Principe du processus N-Rich\u00ae (.pptx)<\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/section>\n\n<\/section>

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\n Comment N-Rich\u00ae fonctionne… Partie 2 <\/h2>\n \n
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Dans chaque cycle d\u2019enrichissement, deux basculements alternent. Chaque basculement se compose de quatre phases s\u2019ex\u00e9cutant en parall\u00e8le sur les colonnes amont (\u00e9lution) et aval (r\u00e9g\u00e9n\u00e9ration\/chargement) : <\/p>\n

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Phase<\/th>\nColonne amont<\/th>\nColonne aval<\/th>\n<\/tr>\n<\/thead>\n
P1 \u2013 \u00c9lution des non-cibles (Parall\u00e8le)<\/strong><\/td>\nLes non-cibles faiblement adsorbantes sont \u00e9lu\u00e9es vers les d\u00e9chets<\/td>\nR\u00e9g\u00e9n\u00e9r\u00e9e et r\u00e9\u00e9quilibr\u00e9e<\/td>\n<\/tr>\n
P2 \u2013 Recyclage faible (W) (Interconnect\u00e9)<\/strong><\/td>\nLes compos\u00e9s cibles faiblement adsorbants sont transf\u00e9r\u00e9s avec dilution en ligne vers la colonne aval<\/td>\nRe\u00e7oit la fraction W \u2014 la cible se r\u00e9adsorbe<\/td>\n<\/tr>\n
P3 \u2013 \u00c9limination du compos\u00e9 principal (Parall\u00e8le)<\/strong><\/td>\nLe compos\u00e9 non-cible (principal) est \u00e9lu\u00e9 vers les d\u00e9chets<\/td>\nCharg\u00e9e avec une nouvelle alimentation \u2014 plus de cible entre dans le syst\u00e8me<\/td>\n<\/tr>\n
P4 \u2013 Recyclage fort (S) (Interconnect\u00e9)<\/strong><\/td>\nLes compos\u00e9s cibles fortement adsorbants sont transf\u00e9r\u00e9s avec dilution en ligne vers la colonne aval<\/td>\nRe\u00e7oit la fraction S \u2014 la cible se r\u00e9adsorbe<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<\/div>\n <\/div>\n \n <\/div>\n\n
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\n Comment N-Rich\u00ae fonctionne… Partie 3 <\/h2>\n \n
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\u00c0 la fin de chaque basculement, les deux colonnes \u00e9changent leurs positions par commutation de vanne et le cycle se r\u00e9p\u00e8te. Le volume d\u2019alimentation par cycle<\/strong> est calcul\u00e9 automatiquement par l\u2019assistant N-Rich \u00e0 partir du chromatogramme par lots. <\/p>\n

L\u2019\u00e9tape d\u2019\u00e9puisement<\/strong> (un basculement, pas de nouvelle alimentation) transf\u00e8re tout mat\u00e9riau enrichi restant de la colonne amont vers la colonne aval avant l\u2019\u00e9lution, minimisant le compos\u00e9 non-cible dans les fractions finales et am\u00e9liorant la puret\u00e9 finale.<\/p>\n

L\u2019\u00e9lution fractionn\u00e9e<\/strong> utilise un gradient peu profond sur les deux colonnes en s\u00e9rie \u2014 \u00e0 la moiti\u00e9 du d\u00e9bit normal avec un gradient plus plat que la m\u00e9thode par lots \u2014 pour maximiser la r\u00e9solution entre les compos\u00e9s enrichis. C\u2019est l\u00e0 que le mat\u00e9riau cible concentr\u00e9 et pr\u00e9-enrichi est collect\u00e9 sous forme de fractions fines. <\/p>\n <\/div>\n \n <\/div>\n\n

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Conception de la m\u00e9thode avec l\u2019assistant N-Rich\u00ae<\/h2>\n

Les m\u00e9thodes N-Rich\u00ae sont con\u00e7ues dans l\u2019assistant N-Rich\u00ae<\/strong> de ChromIQ\u00ae 9 \u2014 une interface \u00e0 onglets qui prend un chromatogramme par lots \u00e0 colonne unique du Contichrom\u00ae CUBE et vous guide vers une m\u00e9thode compl\u00e8te et pr\u00eate \u00e0 l\u2019emploi. Comme pour le MCSGP, le chromatogramme par lots est l\u2019entr\u00e9e essentielle du CUBE. <\/p>\n <\/div>\n \n

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\n \u00c9tape 1 \u2014 Charger le chromatogramme et d\u00e9finir les limites de recyclage <\/h3>\n
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Chargez l\u2019ex\u00e9cution de conception par lots \u00e0 colonne unique du CUBE dans l\u2019onglet Chromatogramme par lots<\/strong>. Faites glisser cinq marqueurs de limite (t1\u2013t5) pour d\u00e9finir les cinq zones : r\u00e9gion de chargement\/lavage, zone de recyclage faible (W), zone de compos\u00e9 principal (P), zone de recyclage fort (S) et r\u00e9gion de stripage. Ces limites d\u00e9finissent exactement quelles parties du chromatogramme sont recycl\u00e9es pour enrichir les compos\u00e9s cibles et lesquelles sont envoy\u00e9es aux d\u00e9chets \u00e0 chaque cycle. <\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n

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\n \u00c9tape 2 \u2014 Configurer le lavage, la r\u00e9g\u00e9n\u00e9ration et le contr\u00f4le d\u2019\u00e9limination du produit <\/h3>\n
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D\u00e9finissez les \u00e9tapes de lavage et de r\u00e9g\u00e9n\u00e9ration dans l\u2019onglet Lavage & R\u00e9g\u00e9n\u00e9ration<\/strong> \u2014 le m\u00eame protocole que votre processus par lots existant. Dans l\u2019onglet \u00ab AutoPeak\u00ae \u00bb<\/strong>, activez le Contr\u00f4le d\u2019\u00e9limination du produit<\/strong> si n\u00e9cessaire. Lorsqu\u2019il est activ\u00e9, le d\u00e9but de l\u2019\u00e9limination du compos\u00e9 principal est d\u00e9clench\u00e9 par UV plut\u00f4t que par le temps \u2014 Contr\u00f4le avant (seuil mAU absolu) si la limite d\u2019\u00e9limination tombe sur la pente ascendante du pic, Contr\u00f4le arri\u00e8re (% du maximum du pic) si sur la pente descendante. L\u2019arr\u00eat de l\u2019\u00e9limination reste bas\u00e9 sur le temps. <\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n

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\n \u00c9tape 3 \u2014 Configurer le fractionnement final <\/h3>\n
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L\u2019onglet Fractionnement final<\/strong> d\u00e9finit l\u2019\u00e9lution par gradient peu profond et la collecte de fractions pour l\u2019\u00e9tape d\u2019\u00e9lution fractionn\u00e9e. Le bouton \u00ab Calcul automatique des conditions d\u2019\u00e9lution \u00bb (activ\u00e9 par d\u00e9faut) calcule automatiquement les param\u00e8tres d\u2019\u00e9lution \u00e0 partir du chromatogramme par lots \u2014 la moiti\u00e9 du d\u00e9bit normal, un gradient plus faible, une longueur de gradient doubl\u00e9e sur les deux colonnes en s\u00e9rie. Ajustez la taille des fractions et les heures de d\u00e9but\/fin. L\u2019aper\u00e7u montre le profil d\u2019\u00e9lution final attendu sur deux colonnes en s\u00e9rie. <\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n

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\n \u00c9tape 4 \u2014 D\u00e9finir le nombre de cycles et g\u00e9n\u00e9rer <\/h3>\n
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Dans l\u2019onglet Param\u00e8tres de la m\u00e9thode & Performance<\/strong>, d\u00e9finissez le nombre de cycles d\u2019enrichissement et examinez les dur\u00e9es de basculement et de cycle. Cliquez sur Enregistrer<\/strong> : l\u2019assistant g\u00e9n\u00e8re les fichiers de m\u00e9thode et un fichier de proc\u00e9dure qui les ex\u00e9cute dans la s\u00e9quence correcte. Chargez la proc\u00e9dure dans ChromIQ\u00ae et ex\u00e9cutez. Le processus s\u2019ex\u00e9cute de mani\u00e8re enti\u00e8rement autonome \u00e0 partir de l\u00e0. <\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n\n \n

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\n 01<\/span>\n \/ <\/span>\n 04<\/span>\n <\/div>\n\n \n