{"id":7449,"date":"2025-11-17T11:34:29","date_gmt":"2025-11-17T10:34:29","guid":{"rendered":"https:\/\/www.chromacon.com\/technologies\/kontinuierliche-anreicherung-n-rich\/"},"modified":"2026-05-11T11:31:49","modified_gmt":"2026-05-11T09:31:49","slug":"kontinuierliche-anreicherung-n-rich","status":"publish","type":"technology","link":"https:\/\/www.chromacon.com\/de\/technologien\/kontinuierliche-anreicherung-n-rich\/","title":{"rendered":"Kontinuierliche Anreicherung (N-Rich\u00ae)"},"content":{"rendered":"
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\n ZWEI-S\u00c4ULEN-ANREICHERUNG <\/p>\n \n

\n Kontinuierliche Anreicherungschromatographie mit N-Rich\u00ae<\/strong>\n <\/h1>\n \n
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Automatisierte Spurenverunreinigungsisolierung.<\/strong> Reichern Sie an, was kaum vorhanden ist \u2014 zyklische Anreicherung zur Herstellung von Referenzstandards, Isolierung von Ladungsvarianten und ICH-Q3A\/Q6B-Charakterisierung: 100\u20131.000\u00d7<\/strong> Anreicherungsfaktor | 80\u201395 %<\/strong> Reinheit \u00fcber Nacht | vollautomatisiert \u00fcber den ChromIQ\u00ae N-Rich\u00ae Wizard.<\/p>\n

Quellen: Bigelow et al. <\/em>(BMS), J. Chromatogr. <\/em>A 2021; Weldon & M\u00fcller-Sp\u00e4th, J. Chromatogr. A 2022<\/em><\/strong><\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n\n

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\n Webinar anfordern<\/span><\/a><\/span> <\/div>\n
\n N-Rich Tutorial-Paper<\/span><\/a><\/span> <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n\n
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\n N-Rich Tutorial-Paper<\/span><\/a><\/span> <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n
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\n Der Engpass bei der Isolierung <\/h2>\n \n
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Regulierungsbeh\u00f6rden verlangen reine, isolierte Referenzstandards f\u00fcr Verunreinigungen \u2013 nicht nur detektierte Peaks. ICH Q3A und Q6B schreiben die strukturelle Identifizierung und toxikologische Qualifizierung von Spurenverunreinigungen und produktbezogenen Varianten vor. Das Problem besteht darin, dass diese Verbindungen nur 0,1\u20135 % des Feeds ausmachen und gemeinsam mit einem dominanten Hauptpeak eluieren, der 10\u20131.000-mal h\u00e4ufiger vorkommt. <\/p>\n

Die herk\u00f6mmliche pr\u00e4parative Batch-HPLC verf\u00fcgt \u00fcber keinen Mechanismus, um dieses Verh\u00e4ltnis zu bew\u00e4ltigen. Hunderte von Injektionen, schrittweises Poolen verd\u00fcnnter Fraktionen, wochenlange Bearbeitungszeit \u2013 und am Ende steht Material, das m\u00f6glicherweise immer noch zu unrein ist, um als Referenzstandard verwendet zu werden. Die Kundensynthese kostet zehntausende Dollar pro Verbindung und ist bei biologischen Verunreinigungen wie Ladungsvarianten, Glykoformen oder teilweise gef\u00fcllten Kapsiden, die nur als produktbezogene Spezies existieren, schlichtweg unm\u00f6glich. <\/p>\n <\/div>\n \n <\/div>\n\n

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N-Rich\u00ae ver\u00e4ndert die M\u00f6glichkeiten<\/h2>\n
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N-Rich\u00ae versucht nicht, eine Spurenverbindung in einem einzigen Durchgang zu isolieren. Stattdessen akkumuliert es diese \u00fcber viele Zyklen hinweg auf der S\u00e4ule \u2013 die Konzentration im System wird schrittweise erh\u00f6ht, bis gen\u00fcgend reines Material vorhanden ist, um es in einer einzigen, fein fraktionierten Elution zu gewinnen. <\/p>\n

Jeder Anreicherungszyklus f\u00fcgt der S\u00e4ule mehr Zielsubstanz hinzu, w\u00e4hrend gleichzeitig die dominante Hauptverbindung in den Abfall geleitet wird. Nach gen\u00fcgend Zyklen ist die Zielsubstanz so weit konzentriert, dass sie mit einer Reinheit eluiert und fraktioniert werden kann, die bei der urspr\u00fcnglichen H\u00e4ufigkeit unm\u00f6glich w\u00e4re. Der Prozess l\u00e4uft vollautomatisch und unbeaufsichtigt ab \u2013 \u00fcber Nacht oder bei Zielen mit sehr geringer H\u00e4ufigkeit \u00fcber mehrere Tage. <\/p>\n

Die Ergebnisse \u00fcber validierte Anwendungen hinweg sind konsistent:<\/p>\n\n \n <\/div> \n

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\n 95 % Reinheit <\/h2>\n \n

\n mAb-Ladungsvarianten in 10 h vs. 300 h mittels HPLC (BMS) <\/p>\n \n \n <\/div>\n\n<\/div>\n\n <\/div><\/section><\/div>\n\n\n\n

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\n 3 Tage <\/h2>\n \n

\n vs. 30+ Tage biosimilarer mAb, 9 Isoformen
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\n 79-fache <\/h2>\n \n

\n Produktivit\u00e4tssteigerung bei der Isolierung von Peptidverunreinigungen
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\n 69-fache <\/h2>\n \n

\n L\u00f6sungsmittelreduktion gegen\u00fcber analytischer HPLC
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Quellen: Bigelow et al. (BMS), J. Chromatogr. A 2021<\/a> \u00b7 Weldon & M\u00fcller-Sp\u00e4th, J. Chromatogr. A 2022<\/a><\/em><\/p>\n

N-Rich\u00ae ist ein grundlegend anderes Werkzeug als MCSGP. MCSGP reinigt ein Hauptprodukt durch Entfernen flankierender Verunreinigungen \u2013 das Ausgangsmaterial ist bereits relativ rein. N-Rich\u00ae akkumuliert hin zu<\/em> einer Verbindung, die anfangs nur in Spuren vorhanden ist und in einem Einzels\u00e4ulenlauf m\u00f6glicherweise nie aufl\u00f6sbar w\u00e4re. Beide nutzen dieselbe Doppel-S\u00e4ulen-Plattform und eine \u00e4hnliche ChromIQ\u00ae-Wizard-Struktur; das Problem, das sie l\u00f6sen, ist jedoch unterschiedlich. <\/p>\n\n \n <\/div> <\/div>\n<\/div>\n

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\n Wie N-Rich\u00ae funktioniert…. Teil 1 <\/h2>\n \n
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N-Rich\u00ae l\u00e4uft als ein einziger, ununterbrochener Vorgang in vier aufeinanderfolgenden Phasen ab:<\/p>\n

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Phase<\/th>\nWas passiert<\/th>\nDauer<\/th>\n<\/tr>\n<\/thead>\n
Design<\/strong><\/td>\nBatch-Chromatogramm geladen, Recycling-Grenzen gesetzt, Methode generiert<\/td>\nEinmalige Einrichtung<\/td>\n<\/tr>\n
Anreicherung<\/strong><\/td>\nn Zyklen zyklischer Akkumulation \u2013 Zielverbindung reichert sich auf der S\u00e4ule an, Hauptverbindung wird in jedem Zyklus entfernt<\/td>\nn Zyklen, bis ausreichend Feed verarbeitet wurde<\/td>\n<\/tr>\n
Depletion<\/strong><\/td>\nEin Schaltvorgang ohne frischen Feed \u2013 verbleibende Hauptverbindung wird entfernt, Zielsubstanz vor der Elution konzentriert<\/td>\n1 Schaltvorgang<\/td>\n<\/tr>\n
Fraktionierte Elution<\/strong><\/td>\nFlacher Gradient \u00fcber beide S\u00e4ulen in Serie \u2013 Zielsubstanz wird eluiert und zur Sammlung fein fraktioniert<\/td>\nEinzelnes Elutionsereignis<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<\/div>\n <\/div>\n \n <\/div>\n\n
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N-Rich\u00ae Prozess-Prinzip (.pptx)<\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/section>\n\n<\/section>

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\n Wie N-Rich\u00ae funktioniert…. Teil 2 <\/h2>\n \n
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Innerhalb jedes Anreicherungszyklus wechseln sich zwei Schaltvorg\u00e4nge ab. Jeder Schaltvorgang besteht aus vier Phasen, die parallel auf der vorgeschalteten (eluierenden) und der nachgeschalteten (regenerierenden\/ladenden) S\u00e4ule ablaufen: <\/p>\n

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Phase<\/th>\nVorgeschaltete S\u00e4ule<\/th>\nNachgeschaltete S\u00e4ule<\/th>\n<\/tr>\n<\/thead>\n
P1 – Elution von Nicht-Zielsubstanzen (Parallel)<\/strong><\/td>\nSchwach adsorbierende Nicht-Zielsubstanzen werden in den Abfall eluiert<\/td>\nRegeneriert und re\u00e4quilibriert<\/td>\n<\/tr>\n
P2 – Schwaches (W) Recycling (Verbunden)<\/strong><\/td>\nSchwach adsorbierende Zielverbindungen werden mit In-line-Verd\u00fcnnung auf die nachgeschaltete S\u00e4ule \u00fcbertragen<\/td>\nErh\u00e4lt W-Fraktion \u2013 Zielsubstanz adsorbiert erneut<\/td>\n<\/tr>\n
P3 – Entfernung der Hauptverbindung (Parallel)<\/strong><\/td>\nNicht-Zielverbindung (Hauptverbindung) wird in den Abfall eluiert<\/td>\nMit frischem Feed beladen \u2013 mehr Zielsubstanz gelangt ins System<\/td>\n<\/tr>\n
P4 – Starkes (S) Recycling (Verbunden)<\/strong><\/td>\nStark adsorbierende Zielverbindungen werden mit In-line-Verd\u00fcnnung auf die nachgeschaltete S\u00e4ule \u00fcbertragen<\/td>\nErh\u00e4lt S-Fraktion \u2013 Zielsubstanz adsorbiert erneut<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<\/div>\n <\/div>\n \n <\/div>\n\n
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\n Wie N-Rich\u00ae funktioniert…. Teil 3 <\/h2>\n \n
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Am Ende jedes Schaltvorgangs tauschen die beiden S\u00e4ulen durch Ventilschaltung ihre Positionen und der Zyklus wiederholt sich. Das Feed-Volumen pro Zyklus<\/strong> wird vom N-Rich Wizard automatisch aus dem Batch-Chromatogramm berechnet. <\/p>\n

Die Depletion-Phase<\/strong> (ein Schaltvorgang, kein frischer Feed) \u00fcbertr\u00e4gt jegliches verbleibende angereicherte Material von der vorgeschalteten auf die nachgeschaltete S\u00e4ule vor der Elution, wodurch Nicht-Zielverbindungen in den finalen Fraktionen minimiert und die Endreinheit verbessert werden.<\/p>\n

Die Fraktionierte Elution<\/strong> nutzt einen flachen Gradientenlauf \u00fcber beide S\u00e4ulen in Serie \u2013 bei halber normaler Flussrate mit einem flacheren Gradienten als bei der Batch-Methode \u2013, um die Aufl\u00f6sung zwischen den angereicherten Verbindungen zu maximieren. Hier wird das konzentrierte, vorangereicherte Zielmaterial als feine Fraktionen gesammelt. <\/p>\n <\/div>\n \n <\/div>\n\n

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Methodendesign mit dem N-Rich\u00ae Wizard<\/h2>\n

N-Rich\u00ae-Methoden werden im N-Rich\u00ae Wizard<\/strong> in ChromIQ\u00ae 9 entworfen \u2013 einer tab-basierten Benutzeroberfl\u00e4che, die ein Einzels\u00e4ulen-Batch-Chromatogramm vom Contichrom\u00ae CUBE \u00fcbernimmt und Sie bis zur fertigen, einsatzbereiten Methode f\u00fchrt. Wie bei MCSGP ist das Batch-Chromatogramm die wesentliche Eingabe vom CUBE. <\/p>\n <\/div>\n \n

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\n Schritt 1 \u2014 Chromatogramm laden und Recycling-Grenzen definieren <\/h3>\n
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Laden Sie den Einzels\u00e4ulen-Batch-Designlauf vom CUBE in den Tab Batch Chromatogram<\/strong>. Ziehen Sie f\u00fcnf Grenzmarkierungen (t1\u2013t5), um die f\u00fcnf Zonen zu definieren: Beladungs-\/Waschbereich, schwache Recyclingzone (W), Hauptverbindungszone (P), starke Recyclingzone (S) und Strip-Bereich. Diese Grenzen legen genau fest, welche Teile des Chromatogramms recycelt werden, um die Zielverbindungen anzureichern, und welche in jedem Zyklus in den Abfall geleitet werden. <\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n

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\n Schritt 2 \u2014 Waschen, Regeneration und Product Removal Control konfigurieren <\/h3>\n
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Legen Sie Wasch- und Regenerationsschritte im Tab Washing & Regeneration<\/strong> fest \u2013 nach demselben Protokoll wie bei Ihrem bestehenden Batch-Prozess. Aktivieren Sie im Tab \u201eAutoPeak\u00ae\u201c<\/strong> bei Bedarf die Product Removal Control<\/strong>. Wenn diese aktiviert ist, wird der Start der Entfernung der Hauptverbindung UV-gesteuert statt zeitbasiert ausgel\u00f6st \u2013 Front Control (absoluter mAU-Schwellenwert), wenn die Entfernungsgrenze auf die ansteigende Peakflanke f\u00e4llt, Tail Control (% des Peakmaximums), wenn sie auf die abfallende Flanke f\u00e4llt. Das Ende der Entfernung bleibt zeitbasiert. <\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n

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\n Schritt 3 \u2014 Finale Fraktionierung einrichten <\/h3>\n
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Der Tab Final Fractionation<\/strong> definiert die Elution mit flachem Gradienten und die Fraktionssammlung f\u00fcr die Phase der fraktionierten Elution. Der Schalter \u201eAutomatic Computation of Elution Conditions\u201c (standardm\u00e4\u00dfig EIN) berechnet die Elutionsparameter automatisch aus dem Batch-Chromatogramm \u2013 halbe normale Flussrate, flacherer Gradient, verdoppelte Gradientenl\u00e4nge \u00fcber beide S\u00e4ulen in Serie. Passen Sie Fraktionsgr\u00f6\u00dfe sowie Start-\/Stoppzeiten an. Die Vorschau zeigt das erwartete finale Elutionsprofil auf zwei S\u00e4ulen in Serie. <\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n

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\n Schritt 4 \u2014 Anzahl der Zyklen festlegen und generieren <\/h3>\n
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Legen Sie im Tab Method Settings & Performance<\/strong> die Anzahl der Anreicherungszyklen fest und \u00fcberpr\u00fcfen Sie die Dauer der Schaltvorg\u00e4nge und Zyklen. Klicken Sie auf Save<\/strong>: Der Wizard generiert die Methodendateien und eine Prozedurdatei, die diese in der richtigen Reihenfolge ausf\u00fchrt. Laden Sie die Prozedur in ChromIQ\u00ae und starten Sie den Lauf. Der Prozess l\u00e4uft von hier an vollkommen unbeaufsichtigt ab. <\/p>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n <\/div>\n\n \n

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